細(xì)胞復(fù)蘇是指將凍存在液氮或者-70℃冰箱中的細(xì)胞解凍之后重新培養(yǎng),細(xì)胞恢復(fù)生長(zhǎng)的過(guò)程。那么你知道在細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)程中有何注意事項(xiàng)嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!
1. 取凍存細(xì)胞時(shí)應(yīng)做好防護(hù)措施,戴好防凍手套,護(hù)目鏡。如果凍存管密封不嚴(yán),液氮可被吸入。由于解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升,將可能發(fā)生爆炸。
2. 細(xì)胞放入水浴中復(fù)蘇時(shí)注意用鑷子夾住細(xì)胞凍存管并在水浴中不時(shí)晃動(dòng),使其受熱均勻,且速度越快越好,這樣可以最大限度的保存細(xì)胞活力,并防止水浴鍋的水進(jìn)入細(xì)胞凍存管造成細(xì)胞污染。
3. 打開細(xì)胞凍存管之前要用酒精棉球?qū)龃婀芟静⒘栏伞W⒁鉄o(wú)菌操作,細(xì)胞復(fù)蘇后的操作在4℃冰盒中進(jìn)行,以減少冷凍保護(hù)劑對(duì)細(xì)胞的毒性。
4. 解凍時(shí)間在2min以內(nèi)完成,且整個(gè)過(guò)程盡量避免吹打細(xì)胞產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致細(xì)胞復(fù)蘇后的生長(zhǎng)狀態(tài)不佳。
5. 復(fù)蘇細(xì)胞的時(shí)候盡量避免凍存管接縫處沾水,防止支原體污染,實(shí)驗(yàn)室定期用過(guò)氧化氫熏蒸,細(xì)胞小黑點(diǎn)增多時(shí)用支原體檢測(cè)試劑盒檢測(cè),并且及時(shí)清除。
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