細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染是一種常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，用于將外源DNA或RNA導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)，以研究基因表達(dá)、功能和調(diào)控機(jī)制。以下是細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的一般步驟和注意事項(xiàng)。今天讓我們一起探討轉(zhuǎn)染效率低下的原因，以為提高轉(zhuǎn)染效率！

一、翌圣生物PEI轉(zhuǎn)染試劑瞬時(shí)轉(zhuǎn)染步驟一

提前一天鋪板，并且確保細(xì)胞均勻分布，具體鋪板技巧，請(qǐng)翻看之前文章，細(xì)胞鋪板總是鋪不均勻?別急，方法來了！轉(zhuǎn)染前將細(xì)胞培養(yǎng)至70-80%的密度，以確保細(xì)胞處于活躍的生長狀態(tài)。

二、翌圣生物PEI轉(zhuǎn)染試劑瞬時(shí)轉(zhuǎn)染步驟二

轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒準(zhǔn)備：根據(jù)轉(zhuǎn)染試劑的說明書準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒DNA。轉(zhuǎn)染試劑的用量通常根據(jù)細(xì)胞類型和轉(zhuǎn)染效率來確定，一般為2-10μL/孔（對(duì)于24孔板）。質(zhì)粒DNA的用量通常為0.1-1μg/孔（對(duì)于24孔板），具體用量需根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮娃D(zhuǎn)染效率進(jìn)行優(yōu)化。

三、翌圣生物PEI轉(zhuǎn)染試劑瞬時(shí)轉(zhuǎn)染步驟三

混合轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒：在無菌條件下，將轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒DNA混合在無血清培養(yǎng)基中，質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染試劑混合后需用槍輕輕混勻，輕輕混合后孵育5-30分鐘，以形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物。

四、翌圣生物PEI轉(zhuǎn)染試劑瞬時(shí)轉(zhuǎn)染步驟四

轉(zhuǎn)染復(fù)合物添加到細(xì)胞：將轉(zhuǎn)染復(fù)合物添加到細(xì)胞培養(yǎng)孔中，輕輕搖動(dòng)以確保均勻分布。

五、翌圣生物PEI轉(zhuǎn)染試劑瞬時(shí)轉(zhuǎn)染步驟五

孵育：將細(xì)胞培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱中，孵育一定時(shí)間（通常為24-48小時(shí)），以便DNA進(jìn)入細(xì)胞并表達(dá)。

六、翌圣生物PEI轉(zhuǎn)染試劑瞬時(shí)轉(zhuǎn)染步驟六

觀察和分析：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模梢酝ㄟ^可熒光顯微鏡下通過熒光觀察轉(zhuǎn)染效率或提蛋白跑WB進(jìn)行驗(yàn)證。

七、翌圣生物PEI轉(zhuǎn)染試劑瞬時(shí)轉(zhuǎn)染部分產(chǎn)品列表

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